實(shí)驗(yàn)文章/實(shí)驗(yàn)方法/免疫學(xué)技術(shù)/酶免疫技術(shù)

羅列了平常大家咨詢問到比較多的8種特殊樣本供參考，前排小板凳筆記本準(zhǔn)備好了沒

1、唾液樣本：

1.1、 唾液一般飯后半小時(shí)內(nèi)不易采集，因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，最好的采集的時(shí)間時(shí)空腹采集；

1.2、將樣品收集于離心管后在-70 度冰凍 1 小時(shí)。 在冰上融化樣品后， 10000rpm 離心 10 分鐘，取上清檢測(cè)；

1.3、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

2、尿液樣本：

2.1、無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心；

2.2、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

3、精液樣本：

3.1、將精液收集于無菌容器中，正常精液射出體外呈稠厚的膠凍狀，射出體外后需在室溫或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纖維蛋白溶解酶的作用下液化，變的稀薄。待精液完全液化后，將精液 4000 rpm 離心 10 分鐘分離精漿進(jìn)行檢測(cè)；

3.2、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

4、糞便樣本：

4.1、盡量采集干的糞便，糞便過稀會(huì)較難處理且降低檢測(cè)的準(zhǔn)確性。采集的重量應(yīng)大于 50 mg，將糞便用 PBS 洗 3 次（最終糞便質(zhì)量：PBS 體積=1:9），用超聲粉碎（或搗碎）后于 5000×g 離心 10 分鐘，取上清檢測(cè)；

4.2、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

5、肺泡灌洗液、腦脊液樣本：

5.1、樣本收集后于 1000g 離心 20 分鐘，離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20度，且應(yīng)避免反復(fù)凍融；

5.2、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

6、痰液樣本：

6.1、選擇痰液中較為粘稠部分稱重， 加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇)。DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反復(fù)吹打，漩渦器振蕩 15s，37 度恒溫水浴振蕩 5 分鐘；

6.2、加入兩倍于痰量的 PBS 緩沖液繼續(xù)振蕩 15-20 分鐘，150 目的金屬絲網(wǎng)過濾，1500 rpm 離心 10 分鐘吸取上清液檢測(cè)；

6.3、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

7、牛乳樣本：

7.1、將牛乳4°，12000g 離心 30 分鐘，去除上層脂肪，以及下層沉淀，取中間層樣本用于檢測(cè)；

7.2、處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80 度不應(yīng)超過 2 個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

8、細(xì)胞樣本

8.1、一瓶細(xì)胞，PBS洗2次，胰蛋白酶消化，加入適當(dāng)培養(yǎng)液，制備成細(xì)胞懸液；

8.2、細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入離心管中，4℃，2500rpm離心5min；

8.3、棄掉上清，沉淀中加入遇冷的PBS,吹打混勻，4℃，2500rpm離心5min；重復(fù)一次這個(gè)步驟；

8.4、去掉上清，加入適量細(xì)胞裂解液（細(xì)胞裂解液中加入PMSF）,置于冰上，裂解30min-1h，裂解過程中可用槍頭吹打或間斷搖動(dòng)離心管，使蛋白充分裂解；

 8.5、取出離心管，4℃，12000rpm離心5min；

 8.6、上清移入EP管中，-20℃保存。

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